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国家药监局关于将化妆品中激素类成分的检测方法和化妆品中抗感染类药物的检测方法纳入化妆品安全技术规范(2015年版)的通告(2019年 第66号)

2019/9/30编辑:Ma Liang 人气:1849


   2019年9月27日,国家药品监督管理局网站发布《国家药监局关于将化妆品中激素类成分的检测方法和化妆品中抗感染类药物的检测方法纳入化妆品安全技术规范(2015年版)的通告(2019年 第66号)》。通告称,国家药品监督管理局组织起草了《化妆品中激素类成分的检测方法》和《化妆品中抗感染类药物的检测方法》,经化妆品标准专家委员会全体会议审议通过,现予以发布,并作为第2.34和2.35项纳入《化妆品安全技术规范(2015年版)》第四章。 

化妆品中激素类成分的检测方法

Determination of Hormone Components in Cosmetics

 

1 范围

本方法规定了采用高效液相色谱-质谱法测定化妆品中的激素类成分,包括定性与定量。

本方法适用于膏霜乳液类、液态水基类、液态油基类、凝胶类、面膜类等化妆品中激素类成分的定性与定量。

2 方法提要

样品以乙腈为溶剂提取,采用高效液相色谱仪分离,质谱检测器检测,根据保留时间和特征离子对的相对丰度比定性、定量离子对峰面积定量,以标准曲线法计算含量。

本方法对63种激素类成分的检出限、定量下限和取样量为0.2 g时的检出浓度、最低定量浓度见表1

1  63种激素类成分的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度

序号

中文名称

英文名称

检出浓度(μg/g

最低定量浓度(μg/g

检出限(ng/mL

定量下限(ng/mL

1

曲安西龙

Triamcinolone

0.03

0.1

0.6

2

2

泼尼松龙

Prednisolone

0.03

0.1

0.6

2

3

泼尼松

Prednisone

0.03

0.1

0.6

2

4

异氟泼尼松

9-fluoroprednisolone

0.03

0.1

0.6

2

5

氢化可的松

Hydrocortisone

0.03

0.1

0.6

2

6

可的松

Cortisone

0.03

0.1

0.6

2

7

甲基泼尼松龙

Methylprednisolone

0.03

0.1

0.6

2

8

倍他米松

Betamethasone

0.03

0.1

0.6

2

9

地塞米松

Dexamethasone

0.03

0.1

0.6

2

10

氟米松

Flumethasone

0.03

0.1

0.6

2

11

倍氯米松

Beclomethasone

0.03

0.1

0.6

2

12

曲安奈德

Triamcinolone acetonide

0.03

0.1

0.6

2

13

地索奈德

Desonide

0.03

0.1

0.6

2

14

氟尼缩松

Flunisolide

0.03

0.1

0.6

2

15

氟轻松

Fluocinolone acetonide

0.03

0.1

0.6

2

16

曲安西龙双醋酸酯

Triamcinolone diacetate

0.03

0.1

0.6

2

17

氟氢缩松

Fludroxycortide

0.1

0.3

2

6

18

泼尼松龙醋酸酯

Prednisolone 21-acetate

0.03

0.1

0.6

2

19

氟米龙

Fluoromethalone

0.03

0.1

0.6

2

20

氢化可的松醋酸酯

Hydrocortisone 21-acetate

0.03

0.1

0.6

2

21

氟氢可的松醋酸酯

Fludrocortisone 21-acetate

0.03

0.1

0.6

2

22

地夫可特

Deflazacort

0.03

0.1

0.6

2

23

泼尼松醋酸酯

Prednisone 21-acetate

0.03

0.1

0.6

2

24

可的松醋酸酯

Cortisone 21-acetate

0.03

0.1

0.6

2

25

卤美他松

Halometasone

0.1

0.3

2

6

26

甲基泼尼松龙醋酸酯

Methylprednisolone 21-acetate

0.03

0.1

0.6

2

27

倍他米松醋酸酯

Betamethasone 21-acetate

0.03

0.1

0.6

2

28

睾酮

Testosterone

0.03

0.1

0.6

2

29

地塞米松醋酸酯

Dexamethasone 21-acetate

0.03

0.1

0.6

2

30

布地奈德

Budesonide

0.03

0.1

0.6

2

31

氢化可的松丁酸酯

Hydrocortisone 17-butyrate

0.03

0.1

0.6

2

32

孕三烯酮

Gestrinone

0.03

0.1

0.6

2

33

氟米龙醋酸酯

Fluorometholone 17-acetate

0.03

0.1

0.6

2

34

甲基睾丸酮

Methyltestosterone

0.03

0.1

0.6

2

35

氢化可的松戊酸酯

Hydrocortisone 17-valerate

0.03

0.1

0.6

2

36

曲安奈德醋酸酯

Triamcinolone acetonide acetate

0.03

0.1

0.6

2

37

二氟拉松双醋酸酯

Diflorasone diacetate

0.03

0.1

0.6

2

38

氟轻松醋酸酯

Fluocinonide

0.03

0.1

0.6

2

39

炔诺孕酮

Norgestrel

0.03

0.1

0.6

2

40

倍他米松戊酸酯

Betamethasone 17-valerate

0.03

0.1

0.6

2

41

哈西奈德

Halcinonide

0.1

0.3

2

6

42

泼尼卡酯

Prednicarbate

0.03

0.1

0.6

2

43

氯替泼诺

Loteprednol etabonate

0.03

0.1

0.6

2

44

阿氯米松双丙酸酯

Alclomethasone dipropionate

0.03

0.1

0.6

2

45

安西奈德

Amcinonide

0.03

0.1

0.6

2

46

卤倍他索丙酸酯

Halobetasol Propionate

0.03

0.1

0.6

2

47

氯倍他索丙酸酯

Clobetasol 17-propionate

0.03

0.1

0.6

2

48

氟替卡松丙酸酯

Fluticasone propionate

0.03

0.1

0.6

2

49

莫米他松糠酸酯

Mometasone furoate

0.03

0.1

0.6

2

50

醋酸甲地孕酮

Megestrol acetate

0.03

0.1

0.6

2

51

醋酸氯地孕酮

Chlormadinone acetate

0.03

0.1

0.6

2

52

倍他米松双丙酸酯

Betamethasone dipropionate

0.03

0.1

0.6

2

53

黄体酮

Progesterone

0.03

0.1

0.6

2

54

醋酸甲羟孕酮

Medroxyprogesterone 17-acetate

0.03

0.1

0.6

2

55

倍氯米松双丙酸酯

Beclmetasone dipropionate

0.03

0.1

0.6

2

56

双氟可龙戊酸酯

Diflucortolone valerate

0.03

0.1

0.6

2

57

氯倍他松丁酸酯

Clobetasone 17-butyrate

0.03

0.1

0.6

2

58

己酸羟孕酮

Hydroxyprogesterone caproate

0.03

0.1

0.6

2

59

环索奈德

Ciclesonide

0.03

0.1

0.6

2

60

雌三醇

Estriol

0.1

0.3

2

6

61

雌二醇

Estradial

0.1

0.3

2

6

62

雌酮

Estrone

0.1

0.3

2

6

63

己烯雌酚

Diethylstilbestrol

0.03

0.1

0.6

2

3 试剂和材料

除另有规定外,本方法所用试剂均为分析纯或以上规格,水为GB/T 6682规定的一级水。

3.1 乙腈:色谱纯。

3.2 正己烷:色谱纯。

3.3 50%乙腈溶液:取乙腈、水等体积混合,摇匀。

3.4 70%乙腈溶液:取乙腈、水按体积比7:3混合,摇匀。

3.5流动相的配制:

流动相A:水

流动相B:乙腈(3.1

3.6标准储备溶液

分别称取各激素标准品(表110 mg(精确到0.00001 g)置于50 mL容量瓶中,加乙腈(3.1)使溶解并定容至刻度。

4 仪器和设备

4.1液相色谱-三重四极杆质谱联用仪。

4.2分析天平。

4.3离心机。

4.4超声波清洗仪。

4.5涡旋混合仪。

5 分析步骤

5.1混合标准溶液的制备

分别取各激素标准储备溶液(3.6)适量,50%乙腈溶液(3.3)配制成浓度在定量下限附近的溶液。

注:实验室完成分析方法的优化后,如能够保持仪器、色谱条件、质谱测定参数等分析条件固定,测定指标重现性良好,可随行质控标准品溶液代替63种激素混合标准品溶液对分析条件的稳定性、结果的重复性进行控制。如发生更改仪器、色谱条件、质谱条件等情况,均需重新对各组分进行定位。

质控标准储备溶液:称取曲安奈德、卤美他松、哈西奈德、地塞米松、地塞米松醋酸酯、氟氢缩松、倍他米松戊酸酯、氯倍他索丙酸酯、环索奈德、雌二醇、己烯雌酚标准品各约10 mg(精确到0.00001 g)置于100 mL容量瓶中,用乙腈(3.1)溶解并定容至刻度,作为质控标准储备液。置-20保存。对于质谱响应较弱的成分,实验室可自行增加该成分作为质控标准物质,以提高筛查准确性。

质控标准混合溶液:分别量取质控标准储备溶液适量,用50%乙腈溶液(3.3)配制成浓度在定量下限附近的溶液。

5.2 样品处理

5.2.1 膏霜乳液类、液态水基类、凝胶类、面膜类样品

称取样品0.2 g(精确到0.001g),置于10 mL具塞比色管中,加入少量乙腈(3.1),在涡旋混合仪上振荡30s至试样与提取溶剂混合均匀,然后加入乙腈至近刻度,超声提取20 min,静置至室温,用乙腈(3.1)定容至刻度,摇匀,以4000 r/min离心10 min,滤过(必要时取上清液适量用50%乙腈溶液(3.3)稀释,稀释液经0.22 μm滤膜过滤),滤液作为待测溶液。

5.2.2 液态油基类

称取样品0.2 g(精确至0.001g),置于离心管中,加入2 mL正己烷(3.2),在涡旋混合仪上分散,然后加入70%乙腈(3.43 mL,涡旋振荡2 min4000 r/min离心10 min,吸取下层溶液至10 mL比色管中,上层正己烷层用70%乙腈(3.43 mL,自涡旋振荡2 min…”起,重复上述步骤一次,合并两次溶液,加50%乙腈(3.3)定容至刻度,滤过(必要时用适量50%乙腈溶液(3.3)稀释,稀释液经0.22 μm滤膜过滤),滤液作为待测溶液。

5.3仪器参考条件

5.3.1 参考色谱条件

色谱柱: C18 150 ×2.0 mm2.2 μm),或等效色谱柱。

流动相梯度洗脱程序:

时间/min

V(流动相A/%

V(流动相B/%

0

95

5

24

15

85

26

15

85

27

95

5

31

95

5

流速:0.3 mL/min

柱温:40

进样量:10 μL

5.3.2 质谱条件

离子源: 电喷雾离子源(ESI源);

监测模式: 正离子、负离子多离子反应监测模式,监测离子对及相关参数设定见表2

  2   63种激素类成分监测离子对及相关参数设定表

编号

物质名称

母离子(m/z

子离子(m/z

CEV

1

曲安西龙

395.2

*357.1

20

 

 

 

225.1

27

2

泼尼松龙

361.2

*343.1

14

 

 

 

147.4

38

3

泼尼松

359.2

*341.1

14

 

 

 

147.0

35

4

异氟泼尼松

379.1

*359

12

 

 

 

341

16

5

氢化可的松

363.2

*121.0

33

 

 

 

105.1

67

6

可的松

361.2

*163.1

30

 

 

 

121.0

40

7

甲基泼尼松龙

375.2

*357.1

15

 

 

 

161.1

29

8

倍他米松

393.2

*355.0

18

 

 

 

146.8

37

9

地塞米松

393.2

*355.0

17

 

 

 

146.8

40

10

氟米松

411.2

*253.0

25

 

 

 

121.1

47

11

倍氯米松

409.2

*279.1

28

 

 

 

147.1

32

12

曲安奈德

435.2

*338.9

20

 

 

 

396.9

15

13

地索奈德

417.2

*323.3

17

 

 

 

225.1

30

14

氟尼缩松

435.2

*321.2

20

 

 

 

397.1

16

15

氟轻松

453.2

*121

40

 

 

 

337.2

20

16

曲安西龙双醋酸酯

479.2

*440.9

14

 

 

 

321

22

17

氟氢缩松

437.2

*361

26

 

 

 

285.2

30

18

泼尼松龙醋酸酯

403.2

*147

32

 

 

 

307.1

17

19

氟米龙

377.2

*278.9

20

 

 

 

320.9

16

20

氢化可的松醋酸酯

405.2

*309.1

24

 

 

 

120.8

44

21

氟氢可的松醋酸酯

423.2

*238.9

39

 

 

 

120.9

41

22

地夫可特

442.2

*141.9

40

 

 

 

123.9

40

23

泼尼松醋酸酯

401.2

*295.0

23

 

 

 

146.8

39

24

可的松醋酸酯

403.2

*162.8

37

 

 

 

343

26

25

卤美他松

445.1

*154.8

32

 

 

 

287

20

26

甲基泼尼松龙醋酸酯

417.2

*399.2

12

 

 

 

253.2

25

27

倍他米松醋酸酯

435.21

*309

22

 

 

 

337

16

28

睾酮

289.2

*97.1

35

 

 

 

109

30

29

地塞米松醋酸酯

435.2

*309

20

 

 

 

337

19

30

布地奈德

431.2

*413.1

15

 

 

 

146.9

31

31

氢化可的松丁酸酯

433.2

*345

19

 

 

 

120.8

31

32

孕三烯酮

309.1

*241.1

30

 

 

 

199.2

44

33

氟米龙醋酸酯

419.2

*279

26

 

 

 

321

21

34

甲睾酮

303.2

*108.9

29

 

 

 

97

30

35

氢化可的松戊酸酯

447.3

*345.2

21

 

 

 

120.8

31

36

曲安奈德醋酸酯

477.2

*338.9

22

 

 

 

320.8

25

37

二氟拉松双醋酸酯

495.2

*316.8

23

 

 

 

278.8

27

38

氟轻松醋酸酯

495.2

*120.8

52

 

 

 

337

25

39

炔诺孕酮

313.2

*245.3

24

 

 

 

109

33

40

倍他米松戊酸酯

477.3

*354.9

14

 

 

 

278.8

28

41

哈西奈德

455.2

*104.9

63

 

 

 

121

38

42

泼尼卡酯

489.2

*380.9

13

 

 

 

114.8

25

43

氯替泼诺

467.2

*359.1

18

 

 

 

265.1

44

44

阿氯米松双丙酸酯

521.2

*301

25

 

 

 

279

24

45

安西奈德

503.2

*338.9

22

 

 

 

321

23

46

卤倍他索丙酸酯

485.2

*391.2

17

 

 

 

353.1

20

47

氯倍他索丙酸酯

467.2

*372.9

17

 

 

 

354.9

20

48

氟替卡松丙酸酯

501.2

*312.9

19

 

 

 

292.9

21

49

莫米他松糠酸酯

521.1

*503

13

 

 

 

263

38

50

醋酸甲地孕酮

385.1

*325.1

20

 

 

 

267.3

24

51

醋酸氯地孕酮

405.1

*309.3

23

 

 

 

267.3

30

52

倍他米松双丙酸酯

505.2

*318.9

20

 

 

 

278.9

35

53

黄体酮

315.2

*109

30

 

 

 

97.3

30

54

醋酸甲羟孕酮

387.2

*327

18

 

 

 

122.9

35

55

倍氯米松双丙酸酯

521.2

*503

14

 

 

 

319

20

56

双氟可龙戊酸酯

479.2

*375.3

18

 

 

 

439.4

17

57

氯倍他松丁酸酯

479.2

*342.8

24

 

 

 

278.9

24

58

己酸羟孕酮

429.1

*313.2

19

 

 

 

271.3

27

59

环索奈德

541.3

*523.2

18

 

 

 

323.2

25

60

雌二醇

271.2

*182.9

-50

 

 

 

145.2

-50

61

雌三醇

287.1

*171

-50

 

 

 

143.2

-60

62

雌酮

269.1

*145

-50

 

 

 

183.1

-50

63

己烯雌酚

267.1

*251.2

-35

 

 

 

222.2

-42

      注:“*”为定量离子对

5.4 定性

取待测溶液与标准溶液在相同分析条件下测定,样品中如呈现定量离子对和定性离子对的色谱峰,被测成分的特征离子峰保留时间与标准溶液对应的保留时间一致,且选择的定性离子的相对丰度比与相当浓度标准品溶液的定性离子的相对丰度比的最大偏差不超过表3的规定,则可以判定样品中存在对应的激素成分。

注:如使用质控标准混合溶液,应满足以下质控条件:各成分均检出相应的特征离子对,特征离子对信噪比SN≥7保留时间相对偏差在±3%内。当样品中检出疑似阳性成分时,应随行相应的标准溶液进行确证。

3 定性判定时离子相对丰度的最大允许偏差

离子相对丰度(k

k>50%

50 %≥ k > 20 %

20 %≥ k>10 %

k≤ 10 %

允许的最大偏差

±20%

±25%

±30%

±50%

5.5 定量

5.5.1 标准储备溶液的制备

称取待测激素标准品约10mg(精确到0.00001 g),置100 mL容量瓶中,用乙腈(3.1)使溶解并定容至刻度。

5.5.2系列基质标准溶液的制备

取与待测样品基质类型相同空白样品6份于10 mL比色管中(0.2 g/份),分别加入标准储备溶液适量,按照“5.2样品处理的操作步骤处理,然后用50%乙腈溶液(3.3)配制系列基质标准溶液。其中氟氢缩松、卤美他松、哈西奈德、雌二醇、雌三醇、雌酮浓度为61020304060 ng/mL,其余组分浓度为 2410204060 ng/mL(标准溶液浓度范围可根据实际情况进行调整)。

5.5.3 样品处理:同5.2

5.5.4 测定

取系列基质标准溶液依次进样,记录定量离子对色谱峰面积并绘制峰面积(A-浓度(C)标准曲线,其线性相关系数r≥0.99。取待测溶液进样,测得定量离子色谱峰面积,根据标准曲线得到待测溶液中各成分的浓度,按“6”计算样品中各成分的含量。

6分析结果的表述

6.1计算

 

式中:ω——样品中激素类组分的质量分数,µg/g

ρ——从标准曲线得到待测组分的质量浓度,µg/mL

V——样品定容体积,mL

m——样品取样量,g

D——稀释倍数(如未稀释则为1)。

在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的15 %

6.2 回收率和精密度

多家实验室验证定量下限浓度回收率为72.7122.1%,相对标准偏差小于15%n=6),其他浓度回收率为80.7119.6%,相对标准偏差小于11%n=6)。


附录A

(资料性附录)

63种激素的中文名称、英文名称、CAS号及分子式

序号

中文名称

英文名称

CAS

分子式

1

曲安西龙

Triamcinolone

124-94-7

C21H27FO6

2

泼尼松龙

Prednisolone

50-24-8

C21H28O5

3

泼尼松

Prednisone

53-03-2

C21H26O5

4

异氟泼尼松

9-fluoroprednisolone

338-95-4

C21H27FO5

5

氢化可的松

Hydrocortisone

50-23-7

C21H30O5

6

可的松

Cortisone

53-06-5

C21H28O5

7

甲基泼尼松龙

Methylprednisolone

83-43-2

C22H30O5

8

倍他米松

Betamethasone

378-44-9

C22H29FO5

9

地塞米松

Dexamethasone

50-02-2

C22H29FO5

10

氟米松

Flumethasone

2135-17-3

C22H28F2O5

11

倍氯米松

Beclomethasone

4419-39-0

C22H29ClO5

12

曲安奈德

Triamcinolone acetonide

76-25-5

C24H31FO6

13

地索奈德

Desonide

638-94-8

C24H32O6

14

氟尼缩松

Flunisolide

77326-96-6

C24H31FO6

15

氟轻松

Fluocinolone acetonide

67-73-2

C24H30F2O6

16

曲安西龙双醋酸酯

Triamcinolone diacetate

67-78-7

C25H31FO8

17

氟氢缩松

Fludroxycortide

1524-88-5

C24H33FO6

18

泼尼松龙醋酸酯

Prednisolone 21-acetate

52-21-1

C23H30O6

19

氟米龙

Fluorometholone

426-13-1

C22H29FO4

20

氢化可的松醋酸酯

Hydrocortisone 21-acetate

50-03-3

C23H32O6

21

氟氢可的松醋酸酯

Fludrocortisone 21-acetate

514-36-3

C23H31FO6

22

地夫可特

Deflazacort

14484-47-0

C23H29NO4

23

泼尼松醋酸酯

Prednisone 21-acetate

125-10-0

C23H28O6

24

可的松醋酸酯

Cortisone 21-acetate

50-04-4

C23H30O6

25

卤美他松

Halometasone

50629-82-8

C22H27ClF2O5

26

甲基泼尼松龙醋酸酯

Methylprednisolone 21-acetate

53-36-1

C24H32O6

27

倍他米松醋酸酯

Betamethasone 21-acetate

987-24-6

C24H31FO6

28

睾酮

Testosterone

58-22-0

C19H28O2

29

地塞米松醋酸酯

Dexamethasone 21-acetate

1177-87-3

C24H31FO6

30

布地奈德

Budesonide

51333-22-3

C25H34O6

31

氢化可的松丁酸酯

Hydrocortisone 17-butyrate

13609-67-1

C25H36O6

32

孕三烯酮

Gestrinone

16320-04-0

C21H24O2

33

氟米龙醋酸酯

Fluorometholone 17-acetate

3801-06-7